AMCA C2 Maleimide（AMCA‑Maleimide，AMCA‑C2‑马来酰亚胺，7‑Amino‑4‑methylcoumarin‑C2‑maleimide），是将AMCA香豆素荧光基团与C2短连接臂、马来酰亚胺反应基团结合的巯基靶向荧光标记试剂。马来酰亚胺为巯基特异性反应官能团，C2为短烷基连接单元，AMCA提供蓝色荧光信号，整体用于体外含巯基底物的共价荧光衍生，实现巯基分子的蓝色荧光示踪与检测。

马来酰亚胺基团可以和巯基（‑SH）发生迈克尔加成反应，在中性pH水环境下即可高效反应，生成稳定硫醚键，反应条件温和，不会轻易破坏底物分子原有骨架。C2短烷基连接臂结构紧凑，间隔距离短，不会引入过大的空间隔离，染料基团距离标记位点很近，适合不希望引入长链间隔臂的标记场景。AMCA香豆素染料拥有较大斯托克斯位移，激发350 nm，发射450 nm，蓝色荧光，和多数样本自发荧光区分明显，适合多色检测组合。

该试剂对pH变化较为敏感，巯基标记*优pH处于中性区间；体系偏碱性条件下，马来酰亚胺会发生水解失活，丧失和巯基的偶联能力；酸性环境则会抑制巯基的亲核活性，降低反应转化率。体系中不能存在游离巯基类杂质，如二硫苏糖醇、β‑巯基乙醇，这类物质会优先消耗标记试剂，造成目标底物标记失败。

试剂本身对光照敏感，储存与全部实验操作均需要避光，光照既会造成AMCA发色团光降解，也会加速马来酰亚胺基团水解。试剂多溶于有机溶剂，水相标记体系需要加入少量助溶剂，保证染料试剂充分溶解，染料析出会造成背景颗粒噪声。标记完成之后，需要借助色谱手段除去未反应游离染料，消除游离染料带来的背景荧光干扰。核磁、质谱可以用于验证标记产物，荧光光谱仪用于表征标记后产物的光谱参数。

AMCA C2 Maleimide填补了蓝色波段巯基靶向标记试剂的品类缺口，依托短C2连接臂与高特异性巯基加成反应，对多肽、蛋白、小分子巯基化合物开展共价荧光修饰，为体外巯基组分的蓝色荧光检测、电泳荧光示踪提供重要的衍生工具。

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