Dibenzocyclooctyne-PEG4-SiR，二苯并环辛烯-PEG4-硅基罗丹明，也被称为DBCO-SiR、Click-SiR，是一款专为活细胞与活体层面的无铜点击化学荧光成像设计的近红外功能探针，它将二苯并环辛烯的无铜点击反应活性，与硅基罗丹明优异的近红外荧光性能相结合，为生命体系内的靶标分子高时空分辨率成像提供了近乎完美的解决方案，彻底解决了传统荧光探针成像深度不足、背景荧光高、光毒性强的痛点。

这款探针的荧光母核硅基罗丹明是近年来发展起来的新一代近红外荧光染料，它将传统罗丹明分子中心的氧原子替换为硅原子，让染料的*大发射波长红移至650-700nm的近红外光谱区间，正好处于生物组织的“光学透明窗口”内。在这个波长区间，生物组织的自发荧光几乎可以忽略不计，光散射程度大幅降低，因此该探针不仅能实现比可见光荧光染料深得多的组织穿透深度，还能获得*低的成像背景，同时硅基罗丹明还保留了传统罗丹明优异的光稳定性，在长时间的激光共聚焦成像过程中不容易发生光漂白，可以支持长时间的活细胞动态追踪实验。

在分子结构设计上，二苯并环辛烯基团与硅基罗丹明荧光母核之间通过一段4个聚合度的短聚乙二醇链相连，这段短连接臂既保证了DBCO基团拥有足够的运动自由度，能快速与叠氮靶标分子发生点击反应，又不会因为连接臂过长导致探针分子过大，影响其在细胞内的扩散穿透效率，同时还能在一定程度上降低硅基罗丹明母核的疏水特性，减少探针分子在细胞内的非特异性聚集，进一步降低成像背景。整个探针分子的分子量控制在合理区间，细胞穿透性优异，无需复杂的转染辅助，就能轻松进入活细胞内部完成标记成像。

在实际成像应用中，这款探针的使用流程*其简便：研究者只需要提前通过代谢标记或基因编码的方法，在活细胞内的靶标蛋白、聚糖或其他目标分子上引入叠氮基团，再将二苯并环辛烯-PEG4-SiR探针加入细胞培养基中，经过短时间的孵育，探针就会通过无铜点击化学反应特异性标记靶标分子，后续即可直接进行高分辨率的活细胞荧光成像。这套成像体系全程没有铜离子参与，不会对活细胞产生任何明显的毒性，同时近红外的发射波长也避免了短波长高能量激发光对细胞的光损伤，目前已经被广泛应用于活细胞内蛋白动态追踪、亚细胞结构长时间成像、活体层面的深层组织成像等前沿研究场景，是当前高性能点击化学荧光探针的典型代表。 

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