TCO-PEG4-NHS（中文名称：(4E)- 反式环辛烯 - 四聚乙二醇琥珀酰亚胺活性酯，CAS：1613439-69-2），英文别名包含 (4E)-TCO-PEG4-NHS Ester、TCO PEG4 succinimidyl ester，是兼具氨基偶联活性与无铜生物正交反应能力的四聚乙二醇双功能交联试剂，分子式 C₂₄H₃₈N₂O₁₀，分子量 514.57，常温外观为淡黄色透明油状液体，高纯度产品 HPLC 纯度可达 98%，是生物正交化学体系中亲水柔性接头核心原料。分子两端分别搭载 NHS 琥珀酰亚胺活性酯、反式环辛烯（TCO）基团，中间四段乙二醇重复单元构成柔性亲水间隔链，完美解决小分子交联剂空间位阻大、水溶性差两大行业痛点。

两端官能团具备分步可控偶联特性，第一步 NHS 活性酯优先与分子表面一级氨基发生酰胺化反应，反应条件温和，pH 7.0~8.5 缓冲体系下即可高效接枝，无重金属催化剂参与；第二步 TCO 反式环辛烯单元与四嗪（Tetrazine）发生逆电子需求狄尔斯 - 阿尔德（IEDDA）环加成点击反应，全程无需铜离子催化，彻底规避铜离子造成的生物大分子氧化损伤，反应速率是铜催化叠氮 - 炔点击反应的上千倍，纳摩尔浓度下即可快速完成共价连接。四聚乙二醇亲水链段大幅提升分子水相溶解度，纯水中可稳定分散，无需高比例有机溶剂助溶，适配各类水溶性多肽、蛋白、多糖大分子修饰。

PEG4 间隔链的柔性结构可显著降低两端偶联基团的空间位阻，当 TCO-PEG4-NHS 接枝于蛋白表面氨基后，柔性醚链向外延伸，TCO 反应位点远离蛋白本体，避免大分子空间遮蔽导致的四嗪结合效率下降，对比短链 TCO-PEG1-NHS，偶联产物的点击反应转化率提升 40% 以上。分子化学稳定性存在明显区间限制，NHS 酯遇水易缓慢水解，水溶液工作液需现配现用；TCO 反式环辛烯会缓慢异构化为无反应活性的顺式环辛烯，固体原料需 - 20℃避光冷冻储存，长期室温放置会完全丧失点击反应活性。

材料合成方向主要用于多功能生物标记探针搭建、聚合物 - 蛋白杂化材料制备、多组分纳米组装体交联。合成多信号复合荧光探针时，先用 TCO-PEG4-NHS 修饰氨基荧光蛋白，再通过 IEDDA 反应连接四嗪标记靶向多肽，一步构建双功能杂化探针；在高分子水凝胶改性领域，将该接头接枝于氨基改性聚丙烯酰胺水凝胶骨架，利用 TCO - 四嗪点击反应原位交联四嗪修饰多糖，制备复合互穿网络水凝胶材料。实验操作全程避免强碱、高温环境，碱性条件会加速 NHS 水解，高温会加剧 TCO 顺反异构失活，降低接头有效利用率。

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