AF-647 NHS（Alexa Fluor 647 - 琥珀酰亚胺酯，AF647 活性酯），CAS 号 407627-60-5，是 Alexa Fluor 家族的明星远红外荧光标记试剂，由磺化花菁结构的 AF647 荧光团与 NHS 活性酯共价结合而成，以高亮度、高光稳定性与低非特异性吸附，成为生物标记、材料成像与多色检测的首选染料。

分子结构上，AF647 荧光母核经多磺酸基修饰，水溶性显著提升，可直接在水相缓冲液中进行标记反应，无需添加有机溶剂。分子式为 C₄₀H₄₉N₃O₁₆S₄，分子量 956.09，磺酸基团赋予分子高负电荷，减少与生物分子非特异性静电吸附，降低背景干扰。NHS 酯基团通过 6 碳烷基连接臂与荧光团相连，减少空间位阻，提升与氨基反应活性。

光学性能方面，AF-647 NHS 激发波长 650-651nm，发射波长 665-672nm，处于远红外至近红外窗口，组织穿透深度达 1-1.5cm，适合深层样本成像。摩尔消光系数高达 270,000L・mol⁻¹・cm⁻¹，量子产率 0.33，荧光亮度远超传统 Cy5 染料。光稳定性优异，抗光漂白能力比 Cy5 高 2 倍，支持长时间激光照射与反复成像。在 pH 4.0-10.0 范围内荧光强度稳定，适配多种实验体系。

标记机制上，NHS 酯在 pH 7.4-9.0 条件下与伯氨基高效偶联，形成稳定酰胺键，标记效率可达 90% 以上。反应条件温和，对蛋白、抗体等生物分子活性影响*小。标记后复合物水溶性良好，在 PBS、Tris-HCl 等缓冲液中稳定存在，不易聚集沉淀。AF-647 NHS 为深蓝色固体，易溶于水、DMSO、DMF，储存需 - 20℃避光密封，防止水解。

应用领域覆盖生命科学、材料科学与分析检测。在生物分子标记中，常用于抗体、链霉亲和素与凝集素标记，制备高特异性荧光探针，用于免疫荧光、流式细胞术与蛋白印迹。核酸研究中，标记氨基修饰的寡核苷酸与 DNA 探针，用于 FISH 与基因芯片检测。材料科学领域，修饰玻璃、聚合物与纳米材料，制备荧光生物传感器与功能涂层。多色成像实验中，与 AF488、AF555 等染料组合，实现多靶点同步检测，信号无串扰。在环境监测中，可用于标记微生物与生物大分子，追踪其在环境中的分布与迁移过程。

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